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色谱柱再生及使用注意事项

发布时间:2019-05-14 09:58:14 作者: 点击数:

1 、色谱柱的运用说明:

(1)色谱柱运用前留意事项:

色谱柱的存储溶液是未指定的,是评价语句中显示的活性相。在使用前,一定要注意色谱柱的储存液和样品的活性相是否是可混溶的。在反相色谱中,如果使用高浓度盐或缓冲液作为洗脱剂,则应先用10%左右的低浓度有机相洗脱剂,否则缓冲液中的盐容易在高浓度有机相中分离并堵塞色谱柱。

(2)活动相:

流动相中使用的各种有机溶剂应尽可能纯净,流动相中的水好是所有玻璃器皿的超纯水或双蒸水。通过0.45μm滤膜一次过滤匹配的活性相效果好,尤其是咸水相。此外,色谱系统中的移动相容器和在线过滤器等设备应定期清洗或更换。键合相填料的适宜pH值范围为2.0~8.0,BDS C18适用于碱性化合物,pH值为2.0~10.0。当需要在pH值适用范围的条件下使用层析柱时,用适合色谱柱储存的溶剂清洗色谱柱,并将每次应用后立即使用的活性溶解,完全置换原来的活性相。

(3)样品:

样品也应清洗,样品过滤器或样品预处理柱(SPE)可用于样品的预处理;如果样品不方便处理,则应使用保护柱。用常规气相色谱法分析样品时,所有溶剂和样品都要严格脱水。

2、色谱柱的保存

(1)日常测试后的反相色谱柱的维护:

实验结束后,用10%甲醇水洗去缓冲液或含盐流动相30分钟,洗去色谱柱中的盐,再用甲醇洗30分钟。注意:请不要用纯水冲洗柱,应加入10%甲醇的水中,以防止填料倒塌。

(2)长期保存色谱柱:

若要将色谱柱保存一段时间,就必须将其储存在适当的溶剂中。反相柱可以保存在纯甲醇或乙腈中,正相色谱柱可以在经过严格脱水的纯乙烷中保存,离子交换柱可以在水中保存(含防腐剂叠氮化钠或硫柳汞)。连接到购买新色谱柱的插头被阻塞。室温下贮藏温度高。

3、色谱柱的再生

由于色谱柱是消耗品,随着施加时间或注入时间的增加,记录器上的曲线将被称为色谱峰。>一般说来,色谱峰高的降低、峰宽的增加或肩峰的出现可能是柱效的降低。

主要研究结果如下:(1)反相柱再生:甲醇:水=10:90(V/V),流动相为乙腈和异丙醇。当柱体积为甲醇:水=10:90(V/V)的20~30倍时,用反相色谱柱进行洗涤。

(2)正相柱再生:正己烷、异丙醇、二氯甲烷和甲醇为活性相精练柱,顺序为20×30次,然后按相反顺序洗涤。请注意,上述溶剂需要严格脱水。

4。色谱柱使用中存在的问题及对策

色谱柱使用中常见的问题是柱压力的增大,如果色谱柱压力在长时间内缓慢增加,则是一种正常现象。但是,在操作过程中,色谱柱压力突然升高(系统管道堵塞、压力传感器故障除外),色谱柱滤板被堵塞或污染,如确定色谱柱的过滤板受到污染,色谱柱可用甲醇反方向冲洗至常压,也可以先用10%稀硝酸超声去除色谱柱10分钟,然后保赢投注法用纯水超声10分钟,从头到有装入色谱柱。

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