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浅谈高效液相色谱仪近年来的发展

发布时间:2019-05-17 10:26:07 作者: 点击数:

1.高效液相色谱仪发展近况
高效液相色谱仪在药物分析中的应用,主要考虑试样的预处理和分析柱、检测器的选择。在样品的前处理中,几天前出现的固相萃取使许多低含量的成分得到精制和纯化,适用于高效液相色谱法(HPLC)的测定。另一方面,孙新国在逆流萃取测定川芎嗪方面取得了较好的结果。采用高效液相色谱法(HPLC)直接测定了弱紫外吸收或无特征紫外吸收的中药成分。灵敏度和分离度不理想。用柱前或柱后衍生法可以更准确地测定这些成分.对于极性大、脂溶性差物质,YWGCl8柱上不易保留,用十二烷基磺酸钠作为离子对试剂,降低其极性,延长柱上的保留时间,取得较好的分离较果。将液相色谱和质谱这两种强有力的在线分析技术相结合,经过30多年的发展,已成为一种较为成熟的分析方法,但从其形成之初就存在一个问题:当液相色谱进入质谱法时,这一联用技术的发展受到流动相变化的制约。溶剂的组成及高温高压电离问题。大气压电离界面具有除溶剂和电离的双重作用。因此,该技术在各个领域得到了广泛的应用。电喷雾离子源是一种软电离技术,一般只产生(MH)(M≤H)-两个分子离子峰,选择性地监测(Mz)190的负分子离子峰,具有较高的灵敏度、准确性和特异性。满足了低浓度药物研究的需要。张莉等人研究的三维高效液相色谱法可用于葛根素和阿魏酸的同时测定。通过实验证明:如果选择合适的柱温等色谱条件,乙醇作为反相高效液相色谱流动相,分析中药及中成药中有效成分,既安全又准确。普通检测器很难对结构相似的物质进行检测。高效液相色谱-电化学法可有效测定黄连粉中黄芩苷和黄芩苷的含量。样品经色谱柱分离后,用荧光分光度计测定。影响因素较多,测定复杂。改进的高效液相色谱-荧光法不经衍生化和富集分离即可除去杂质,但只需化学处理即可去除杂质。样品浓缩后可直接进样。该方法还可用于贯叶连翘中金丝桃素的含量测定。采用高效液相色谱法(HPLC)和差示折光法测定黄芪精口服液中黄芪甲苷的含量。对于只有紫外末端吸收的情况,当使用紫外检测时,灵敏度低,基线容易漂移,差分折射光检测容易受到外界条件的干扰,蒸发散射检测器可以克服上述缺点,其响应值只与样品的质量有关。信号与质量成正比,不同的化合物,相同的质量,相应的信号基本上是相同的。蒸发光散射检测方法是基于非挥发性样品的光散射度与其质量成正比,而与其所含基团的性质无关的事实。只要选择合适的检测器参数,流动相和溶剂就可以完全汽化,不会产生信号,而样品中的每一组分都以非挥发性粒子和散射光的形式存在。因此,蒸发光散射检测器可用于含不同基团的多组分的同时分离和分析。与紫外法和荧光法相比,蒸发光散射法对不同物质的响应因子基本相同,不存在低浓度、高响应或高浓度、低响应的现象。该方法有利于不同配比混合物的准确测定。采用高效液相色谱法-蒸发光散射法测定银杏叶中萜烯内酯的含量、红参胶囊中Rg1Re的含量以及扶黄中大黄酸的含量。

 

2.高效液相色谱(HPLC)

2.1的研究趋势缩短了分析时间,提高了分离效率。应用先进的检测仪器和方法调整或改变流动相和固定相,采用梯度洗脱、柱切换技术有望解决这一问题。梯度洗脱高效液相色谱(HPLC)可用于宽极性范围内的样品分析,与等距洗脱相比有很大的优势。但是,对于成分复杂、极性范围较广的中药样品,其强度还不够强。多柱高效液相色谱法又称多维高效液相色谱法。梯度洗脱除了可以改变流动相的浓度外,还可以改变固定相的类型、键度、粒径、柱长、柱径、流动相类型和浓度。

 2.2进一步发展自动化、智能化和组合技术。液相色谱与质谱联用在国外已成为测定低浓度生物药品中药物及代谢物的首选方法,LC-MS-MS法测定血浆中HIV-1蛋白酶,准确高效,血浆中残留的内源性组份和其他药物不干扰测定,既节省材料又节约时间。已应用于体液、血浆和血清中药物的分析。采用液相色谱-质谱联用(LC-MS)法对清开灵注射液中的胆酸进行了分析,结果满意。高效液相色谱(HPLC)结合核磁共振(NMR)技术在药物分析中具有良好的应用前景。新提出的智能多柱高效液相色谱系统利用开关技术的模块化分离性能,将样品切换到不同的色谱柱上,然后用合适的流动相进行洗脱。整个过程采用智能控制。


 3.高效液相色谱仪在中药分析中的应用前景中药研究的总趋势是通过从单味药到复方的不同配伍和煮沸时间的研究,进行全组分析。只有这样,才能找出中药化学成分的变化规律,找出中药作用机理之间的有机联系。中药成分繁多,且各种成分的性质遍布所有极性段、酸碱范围。实现多组分分析的简单的方法是在足够长的柱上使用一个温和的流动相,以便在很长的一段时间内避开。但这与现代分析要求的简便快速相违。大量的应用研究表明,高效毛细管电泳法在中药成分分析,特别是在高极性化学成分分析方面具有很大的优势,在大量复方制剂的分析中表现出很强的分析能力。由于毛细管几乎不表现出经常在高效液相色谱仪中存在的柱床污染,并且所使用的毛细管仅需要短时间洗涤,所以可以快速高效地进行第二样品的分析,并且分辨率高。毛细管电色谱是一种集高效液相色谱(HPLC)和毛细管电泳(CE)优点于一体的新型电分离微柱液相色谱技术。以固定相与样品之间的相互作用为分离机理,以电渗流为流动相驱动力的色谱过程。近年来,一些先进的检测仪器被成功地应用于高效液相色谱仪分析中,使高效液相色谱仪的应用更加广泛,并充分利用了高效、快速、选择性好、灵敏度高等优点。建立一种较为系统的成分分析方法。结合质谱、梯度洗脱、柱切换技术,结合先进的检测技术,结合分子生物学和现代分子药理学,必将在中药分析中发挥重要作用。 

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